产品货号:
KD0059
中文名称:
5×蛋白上样缓冲液(含β-ME)
英文名称:
5×Protein Loading Buffer(With β-ME)
产品规格:
10mL|10mL×10|5×1mL
发货周期:
1~3天
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5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(还原)是以溴酚蓝为染料,5倍浓缩的SDS-PAGE凝胶电泳上样缓冲液,应用于还原型SDS-PAGE的蛋白样品制备和上样。
5×蛋白上样缓冲液分别含有DTT和β-ME,可使蛋白质分子的链内二硫键和链间二硫键断裂,通过二硫键连接的各蛋白亚单位彼此分离,经考马斯亮蓝染色以后在电泳凝胶上显现清晰蛋白条带。
β-巯基乙醇和DTT都是还原剂,防止蛋白质被氧化,β-巯基乙醇常用浓度为5~20mmol/L,DTT为0.5~1mmol/L。因为β-巯基乙醇加入缓冲液后24小时易被氧化,其后加速蛋白质的失活,而DTT氧化后形成稳定的分子内二硫健,并不危及蛋白的巯基,所以在蛋白制备中常用β-巯基乙醇,而长期储存用DTT。
含DTT和β-ME冻存的上样液电泳使用区别不明显,除了β-ME气味较大之外。
组分 | 10mL | 10mL×10 | 5×1mL |
5×蛋白上样缓冲液(含β-ME) | 10mL | 10mL×10 | 5×1mL |
说明书 | 1份 |
保存:-20℃
使用方法:
- 将5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(还原)与蛋白样品按照1:4的比例混匀。(加样前在室温或37~40℃数分钟解冻后轻轻摇匀,以确保溶液混合均匀。)
- 将蛋白样品置于95℃中加热3~5分钟。
- 待蛋白样品充分变性后冷却至室温,以小于3000rpm的条件离心30秒。
- 离心后,以微量进样器取适量上清,直接加入SDS-PAGE凝胶加样孔内。
- 进行常规电泳,通常染料到达距离凝胶底端0.5-1cm处即可停止电泳。
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